人鉀離子通道多聚體結構域蛋白9（KCTD9）酶聯免疫分析試劑盒
使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                              96T

10pg/ml-450pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9 （KCTD9）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9）水 平。用純化的人鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9）抗體包被微孔板，制成固相抗體， 往包被單抗的微孔中依次加入鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9），再與 HRP 標記的 鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經 過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉 化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鉀離子通道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9）呈正相 關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人鉀離子通 道多聚體結構域蛋白 9（KCTD9）濃度。

試劑盒組成

標本要求

1 ．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟

1.     標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

2.     加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.     溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液：將 30 倍（48T 的 20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.     洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶標試劑 50μl ，空白孔除外。

7.     溫育：操作同 3。

8.     洗滌：操作同 5。

9.     顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl ，再加入顯色劑 B50μl ，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.   終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

計算